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做核酸提取实验的时候，长时间不正确的操作和保存方法确实会导致核酸降解，也就是 DNA/RNA 分子中的碱基和戊糖间的氮糖苷键，或者磷酸二酯键发生水解，导致 DNA/RNA 链发生断裂。
浓度低的 DNA/RNA 会影响实验结果，甚至无法完成设计的实验
一顿操作猛如虎，核酸降解 “我命苦”！
● 提取的样品量要符合试剂的配比，尽量控制样品量达到合适比例
● 每个步骤都要注意充分的混合均匀，避免团块的残留影响实验结果
● 在洗脱时，时间过长或者温度过高，核酸有可能会降解
● 去除环境中 RNase 酶的污染或强有力地抑制其活性
● 可用 EDTA 等金属离子整合剂整合 Mg2+ 以抑制 Dnase 的活性
● 提取时取出样品后立即在低温下研磨裂解细胞，以防 RNA 降解
● 样本切记不可反复冻融，提取的样本要注意在合适的温度保存，长期保存尽量 -80 ℃
● 样本量和裂解液等试剂的配比要尽量控制在合适的范围
● 混合均匀以确保裂解充分和没有团块残留
● 晾干的步骤要充分，否则可能会导致醇类等杂质的残留
● 磁棒振荡幅度太小或混合时间太短，磁珠上有杂质残留会影响磁珠吸附核酸的能力
● 样品量与试剂的配比要控制在一定范围，避免超过裂解能力
● 破碎研磨的步骤处理细节很重要，一定要充分研磨，这是核酸提取的首要条件
● 在洗脱的步骤，使用足量的洗脱液洗脱并充分混匀，避免有团块残存
● 实验耗材要匹配，如不同的吸附柱或磁珠的核酸吸附能力不同，也会影响核酸的得率
其实核酸提取不难，就是时间长、实验要时刻小心才行
有一个「一劳永逸」的办法
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· 实验案例 ·
